Aislamiento y caracterización parcial de isoamilasas Rhyzopertha dominica Fab. (Coleoptera: Bostrichidae)

Abstract

Tesis de maestría en ciencias y tecnología en alimentos. Se aislaron tres isoamilasas de Rhyzopertha dominica (denominadas IA-0. 70, IA-0. 79 y IA-0.90, de acuerdo a su movilidad relativa en PAGE), mediante concentración fraccionada con sulfato de amonio seguida de una cromatografía en columna en fenil sefarosa CL-4B. Las IA-0.70 y IA-0.79 mostraron un pH óptimo de 7.0, mientras que para la [A-0.90 fue de 6.5. Las tres IA presentaron estabilidad a 50ºC por I hora, pero a 60ºC se perdió el 50% de actividad a los 20 minutos de incubación y se inactivaron en una hora. Las IA-0. 70 y IA-0. 79 son inhibidas con fracciones de albúminas de un trigo hexaploide (variedad Júpare), mientras que la IA-0.90 fue altamente resistente a la inhibición. El β- mercaptoetanol en concentraciones superiores a 30 mM incrementa 2.5 veces más la actividad amilolítica de las tres isoamilasas, usando almidón de trigo como sustrato. El patrón de acción de las tres isoamilasas fue el típico de las endoamilasas, sin embargo, se observaron diferencias en la eficiencia hidrolítica medida bajo el coeficiente Vmax/Km., en almidón, amilopectina y amilosa. La acción hidrolítica de la lA-0.90 en almidón y amilopectina (Vmax/Km=75.0 y 56.3, respectivamente) fue menos eficiente que en ami losa (f'max/Km=240.2). La lA-0.70 hidroliza al almidón y a la amilosa en rangos similares (Vmax/Km=203 en promedio), pero en amilopectina no fue tan eficiente (Vmax/Krn= 123 6) la suma de resultados sugiere que las IA-0. 70 y lA-0. 79 pertenecen a un grupo de isoarnilasas sacarificantes que hidrolizan fragmentos de oligosacáridos provenientes de la acción bidrolítica de la IA-0.90. La acción simultánea de las tres isoarnilasas en almidón, así como la alta resistencia de la IA-0.90 a los inhibidores de trigo, podría facilitar al insecto a reproducirse y alimentarse de los granos de trigo durante el almacenamiento.